什么是熒光？

熒光是一種分子現象，一種物質吸收某種顏色的光，與此同時輻射另外一種顏色的光，后者能量更低，波長更長，這種過程被稱為激發(fā)和發(fā)射，很多物質都會表現出一定的熒光特征。在早期，觀察的都是初級熒光或自發(fā)熒光，但是現在已經開發(fā)出許多染料，他們能夠發(fā)出很亮的熒光，可以用來給樣品某些部分染色，這種方法叫次級或間接熒光，這些染料叫熒光染料，當與抗體和核酸等其他有機物質軛和時，稱為熒光探針和熒光團。

熒光是怎么產生的？

熒光染料吸收特定的波長的光（激發(fā)光）的照射，與此同時釋放出特定波長的光（發(fā)射光），熒光染料所需要的激發(fā)光是特定波長的，發(fā)射熒光也是特定波長的，發(fā)射光的波長大于激發(fā)光的波長（短波激發(fā)長波）。

熒光光譜

激發(fā)光譜通過測量熒光物質的熒光發(fā)射強度隨激發(fā)波長變化而獲得的光譜，發(fā)射光譜反映熒光物質的熒光發(fā)射強度與發(fā)射光波長之間相互關系的光譜曲線。

熒光顯微鏡和熒光濾塊

熒光顯微鏡是利用熒光特性進行觀察、成像的光學顯微鏡，廣泛應用于細胞生物學、神經生物學、植物學、微生物學、病理學、遺傳學等各領域。熒光成像具有高靈敏度和高特異性的優(yōu)點，非常適合進行特定蛋白、細胞器等在組織及細胞中的分布的觀察，共定位和相互作用的研究等。熒光顯微鏡大致主要分為正置熒光顯微鏡、倒置熒光顯微鏡、體視熒光顯微鏡。

熒光濾塊是熒光成像中的重要部件，主要有激發(fā)濾片、發(fā)射鋁片、二向分光鏡組成，安裝在激發(fā)塊盒子里。激發(fā)濾片選擇激發(fā)光來激發(fā)樣品，阻擋其他波長的光；通過激發(fā)濾片的光經過二向分光鏡（其作用是反射激發(fā)光和透射熒光），反射后通過物鏡聚焦，照射到樣品，激發(fā)出對應的熒光即發(fā)射光，發(fā)射光被物鏡收集，透過二向分光鏡，到達發(fā)射濾片。而熒光濾塊一般又可分為長通（LP）和帶通（BP），帶通通常由中心波長和區(qū)間寬度確定，如530/40nm表示可通過510-550nm的光。長通濾色片如510 LP，表示可以通過波長長于510nm的光。